SNP Pol DNA 聚合酶可輕松、可靠和快速地特異性區(qū)分等位基因，例如 B. 使用 CRISPR/Cas9 設(shè)定點(diǎn)突變，檢測錯誤的 CRISPR/Cas9 產(chǎn)品或驗(yàn)證測序結(jié)果。SNP Pol DNA 聚合酶高度特異性地識別引物-模板復(fù)合物是否錯配。錯配（點(diǎn)突變）必須位于引物的 3' 端。因此，突變等位基因可以與野生型等位基因*區(qū)分開來——無需測序，因?yàn)榫酆厦冈阱e配的情況下根本不會擴(kuò)增。

只需將引物放在假定的點(diǎn)突變上（重要提示：點(diǎn)突變必須位于 3' 末端），聚合酶將以 * 的準(zhǔn)確度檢測該區(qū)域的錯配：如果堿基與引物的 3' 末端互補(bǔ)在 DNA 上 - 鏈顯示突變而引物沒有，則不會發(fā)生擴(kuò)增 - 快速 * 確定！
因此，SNP Pol DNA 聚合酶可用于以簡單、省時且經(jīng)濟(jì)高效的方式篩選點(diǎn)突變。

變體SNP PolTaq DNA 聚合酶 >具有 5'-3' 核酸酶活性，因此可以與特定的引物探針一起使用，例如 Taqman® 探針或分子信標(biāo)。

以*提供一次性測試樣品。在德國境內(nèi)運(yùn)送時無運(yùn)費(fèi)！測試樣品價格將在產(chǎn)品正式訂購時退還。

描述
SNP Pol DNA 聚合酶（單核苷酸的高區(qū)分度）) 是一種高度選擇性的 DNA 聚合酶。專為等位基因特異性鑒別而開發(fā)，需要非常高的鑒別率（high discriction）：例如用于等位基因特異性PCR（ASA；AS-PCR）、等位基因特異性引物延伸（AS-PEX）、SNP分析、基因分型或甲基化特異性 PCR (MSP)。許多 DNA 聚合酶耐受錯配的引物-模板復(fù)合物。另一方面，SNP Pol DNA 聚合酶可以特異性地區(qū)分它們（高度區(qū)分），并且只提供具有匹配引物對的靶向 PCR 產(chǎn)物！Genaxxon SNP Pol 和 SNP PolTaq DNA 聚合酶使用等位基因特異性 PCR 可以高達(dá) * 區(qū)分兩個等位基因，并且在簡單的 qPCR 之后，可以清楚地說明存在哪些等位基因。

使用等位基因特異性 PCR，可以量化野生型序列池或背景中的突變率。NGS確定的突變頻率也可以使用等位基因特異性 PCR 和 SNP Pol DNA 聚合酶進(jìn)行驗(yàn)證。SNP PolTaq DNA 聚合酶非常適合分析液體活檢樣本。有了它，可以很好地分析和量化癌癥突變的存在和頻率。

圖片： SNP Pol DNA聚合酶的應(yīng)用實(shí)例

我們建議使用短擴(kuò)增子（約 60-200 bp）的引物以獲得最佳結(jié)果。更長的擴(kuò)增子也是可能的。
在較長的擴(kuò)增子 >500 bp 的情況下，可能需要添加鎂 (+0.5 - 1.5mM)。

故障排除：
PCR 30 個循環(huán)后沒有條帶！
缺失或弱波段情況下的優(yōu)化過程

- 實(shí)時 PCR 方法
- 檢查 dNTP 濃度。這應(yīng)該在 200 到 300 µM 之間（在 PCR 中）。
- 增加循環(huán)次數(shù)（至少 35，最好等于 40）

測試優(yōu)化 -
循環(huán)次數(shù) 在終點(diǎn)檢測中，30 次循環(huán)并不總是足以生成清晰可見的條帶。例如，如果基線少于 200 個 DNA 拷貝。因此，測試應(yīng)使用實(shí)時 PCR 運(yùn)行，或設(shè)置五個平行 PCR，其中一個在五個不同循環(huán)后從 PCR 設(shè)備中移除（示例如下）。

終點(diǎn)檢測：
與 SNP Pol DNA 聚合酶平行設(shè)置五個相同的 PCR 反應(yīng)。
在 20、25、30、35 和 40 個循環(huán)時，從循環(huán)儀中取出一個 PCR 管，最后將所有五個反應(yīng)加載到瓊脂糖凝膠上。
這可以很容易地查看針對給定應(yīng)用（起始材料、目標(biāo)、引物）的 PCR 中的最佳循環(huán)數(shù)。

使用細(xì)胞裂解物的 SNP Pol PCR
動物細(xì)胞和大腸桿菌可直接用于使用 SNP Pol DNA 聚合酶的 PCR！不需要單獨(dú)的裂解或蛋白酶 K 消化。
程序 PCR 方法：

1. 每批 PCR 需要 50 - 500 個細(xì)胞！
2. 用引物和緩沖液制備 PCR 混合物并放在冰上！
3. 將挑取的菌落直接放入 10-20µL 水中（無需單獨(dú)裂解，無需蛋白酶 K 消化），
短暫渦旋（5 秒），然后將此細(xì)胞懸液直接加入 PCR 反應(yīng)混合物中，例如
用于 PCR 的 10µL 細(xì)胞懸液 -接近 20µL 總體積。初始變性時間2-3分鐘
即可，必要時可延長至5分鐘。
每個反應(yīng)最多 100 個拷貝的基因組 DNA 相對較低，但應(yīng)該仍然有效。
這種細(xì)胞懸液的其余部分也可以冷凍起來進(jìn)行進(jìn)一步測試。

可選：
4. 如果可能：進(jìn)行實(shí)時 PCR！

SNP Pol DNA 聚合酶(M3009 >)或(M3061 >)可與非特異性熒光染料（例如來自 Genaxxon 或 SybrGreen® 的Green DNA Dye >）一起用于實(shí)時 PCR。當(dāng)使用特定的 PCR 探針時，只能使用 SNP PolTaq DNA 聚合酶，因?yàn)橹挥兴哂?5'-3' 外切核酸酶活性。

憑借我們的高品質(zhì)dNTP 作為一組（M3015.4100 和 M3015.0250）>或作為混合物（M3016.1010）>或我們的DNA 標(biāo)記 >和我們廉價的標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖 >我們?yōu)槟峁└嘤糜?PCR 的產(chǎn)品。

SNP Pol DNA 聚合酶的應(yīng)用領(lǐng)域
- 點(diǎn)突變的監(jiān)測、驗(yàn)證和檢測
- 識別正確或錯誤的 CRISPR/Cas9 產(chǎn)品
- 測序結(jié)果的驗(yàn)證/驗(yàn)證
- 突變的量化（例如 NGS 結(jié)果）
- 通過等位基因檢測 SNP-特異性擴(kuò)增 (ASA) / 等位基因特異性 PCR
- 亞硫酸氫鹽處理的 DNA（CpG 甲基化側(cè)）后的甲基化特異性 PCR (MSP)
- HLA 基因分型
- 微測序
- 使用水解探針的實(shí)時 PCR
- 實(shí)時多重 PCR

-秀麗隱桿線蟲中的 DamID-seq 數(shù)據(jù)。

Sharma R、Ritler D、Meister P.
秀麗隱桿線蟲發(fā)育過程中核組織 DNA 腺嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶鑒定分析工具。創(chuàng)世紀(jì)。2016 年 2 月 4 日。doi：10.1002/dvg.22925。

- 使用 SNPase DNA 聚合酶進(jìn)行微測序 SNP 基因分型可以通過以下所述的程序進(jìn)行：

Lovmar L、Fredriksson M、Liljedahl U、Sigurdsson S、Syvänen AC。
通過微測序和微陣列進(jìn)行的定量評估揭示了全基因組擴(kuò)增 DNA 的準(zhǔn)確多重 SNP 基因分型。核酸研究 2003；31:e129 。

- HiDi DNA 聚合酶的等位基因特異性錯配選擇性

Drum M、Kranaster R、Ewald C、Blasczyk R、Marx A (2014) 水生棲熱菌 DNA 聚合酶的變體在等位基因和甲基化特異性擴(kuò)增中的應(yīng)用具有更高的選擇性。公共科學(xué)圖書館一號 9(5)：e96640。doi:10.1371/journal.pone.0096640