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zenogenpharma STEM-CELLBANKER說明書

更新時(shí)間:2022-07-05      點(diǎn)擊次數(shù):2754

 


zenogenpharma STEM-CELLBANKER說明書


STEM-CELLBANKER ® EX GMP 級
(化學(xué)定義的冷凍保存溶液

 

    • 描述:

    • STEM-CELLBANKER ® EX GMP 級 (SCB EX) 是一種細(xì)胞冷凍保存解決方案,可擴(kuò)展細(xì)胞治療的可能性。SCB EX 是一種簡單的成分,由經(jīng)靜脈注射證明的成分組成。它是一種含有 DMSO 的冷凍保存溶液和一種無異種物質(zhì)的產(chǎn)品,配方不含血清和動(dòng)物成分。SCB EX 還可以保存人類造血干細(xì)胞和人類脂肪來源的基質(zhì)/干細(xì)胞。SCB EX 的制造符合日本、歐盟、美國和 PIC/S GMP 指南。所有將產(chǎn)品暴露在環(huán)境中的操作均在 A 級區(qū)域進(jìn)行,以確保無菌。

      ※本產(chǎn)品已在 PMDA 內(nèi)的 MF 中注冊。
      ※本產(chǎn)品成分與HSC-BANKER ® GMP等級相同。

    • 應(yīng)用:

    • 使用脂肪衍生基質(zhì)/干細(xì)胞 (ADSC) 進(jìn)行冷凍保存性能測試

      測試:EMO生物醫(yī)學(xué)

    • 1. 細(xì)胞活力測試

      ADSC 與 SCB EX 一起冷凍保存 4、12、24 和 48 周。解凍后立即評估細(xì)胞活力(左圖)和解凍后過夜(右圖)。用 SCB EX 冷凍保存的細(xì)胞即使在長期冷凍保存后也顯示出高活力,即使在過夜休息后也保持高活力。

      2. 細(xì)胞恢復(fù)測試

      ADSC 與 SCB EX 一起冷凍保存 4、12、24 和 48 周。然后,我們評估解凍后過夜的細(xì)胞附著(細(xì)胞恢復(fù);左圖)和解凍和培養(yǎng) 72 小時(shí)后的細(xì)胞生長速率(倍增時(shí)間;右圖)。結(jié)果表明,即使經(jīng)過長期冷凍保存,細(xì)胞恢復(fù)和細(xì)胞生長速度也沒有受到影響。

      3. 小區(qū)身份測試

      ADSC 與 SCB EX 一起冷凍保存 4、12、24 和 48 周。然后,我們使用流式細(xì)胞儀的陽性和陰性標(biāo)記評估解凍后的細(xì)胞身份。結(jié)果表明,即使在長期冷凍保存后,用每種標(biāo)記物標(biāo)記的細(xì)胞百分比也不受影響。

      陽性標(biāo)記;CD29、CD73、CD90 和 CD105
      陰性標(biāo)記;CD11b、CD19、CD34、CD45 和 HLA-DR

      陽性標(biāo)記數(shù)據(jù)

      4. 細(xì)胞功能測試
       (IDO 量化和抑制 T 細(xì)胞增殖測定)

      ADSC 與 SCB EX 一起冷凍保存 4、12、24 和 48 周。然后,我們評估了解凍后 ADSC 的細(xì)胞功能。結(jié)果表明,即使經(jīng)過長期冷凍保存,在MSCs存在下IDO表達(dá)和T細(xì)胞增殖抑制率均不受影響。

      ※吲哚胺-2,3-雙加氧酶(IDO)

    • 協(xié)議(CELLBANKER ®系列)

    • 冷凍

      為獲得最佳結(jié)果,冷凍保存的細(xì)胞應(yīng)處于對數(shù)生長期。可以替代類似或標(biāo)準(zhǔn)的冷凍方案。

      重要提示:最佳方案可能會(huì)隨細(xì)胞類型而變化。

      解凍

      ※如果成活率低,請嘗試使用冷凍箱等慢速冷凍方法。

      • 從儲(chǔ)存中取出冷凍細(xì)胞,在 37 ℃ 振蕩水浴中快速解凍。

      • 立即將每 1ml 細(xì)胞與 10ml *細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋并輕輕混合。

      • 輕輕離心沉淀細(xì)胞(3-5 分鐘,1,000~2,000rpm,4 ℃)。取出上清液抽吸器。

      • 用適當(dāng)體積的*細(xì)胞培養(yǎng)基輕輕懸浮細(xì)胞。并放入培養(yǎng)瓶中。

      • 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)協(xié)議繼續(xù)進(jìn)一步的培養(yǎng)程序。

      • 檢查并確保細(xì)胞培養(yǎng)物無污染、健康狀況和適當(dāng)融合等。

      • 進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)以確定細(xì)胞的活力

      • 輕輕離心沉淀細(xì)胞(3-5 分鐘,1,000~2,000rpm,4℃)。使用吸氣器去除上清液。

      • 用 CELLBANKER 冷凍保存培養(yǎng)基輕輕懸浮細(xì)胞(1 ml 用于 5×105 - 5×106 細(xì)胞)。

      • 將細(xì)胞懸液以 1ml 等分試樣分裝到已標(biāo)有細(xì)胞系名稱、細(xì)胞濃度、傳代日期和其他重要信息的冷凍保存小瓶中。

      • 將小瓶直接置于-80℃保存。如有必要,在小瓶冷凍至少 24 小時(shí)后,將冷凍小瓶轉(zhuǎn)移到液氮儲(chǔ)罐中。

    • 儲(chǔ)存和穩(wěn)定性:

    • 儲(chǔ)存于 2 至 8 或低于 -20 攝氏度。該產(chǎn)品在此儲(chǔ)存溫度下自生產(chǎn)之日起可保持穩(wěn)定 3 年。

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