作為一種分析性生物化學測定，ELISA 涉及通過在“分析"期間繼續使用液體試劑的方法（即受控序列）檢測液體樣品中的“分析物"（即對其存在進行定量或定性分析的特定物質）。生化反應會產生一個信號，該信號可以很容易地量化和解釋為樣品中分析物量的量度），該信號保持液態并保持在反應室內或保持反應物被包含在內。

作為一種異質測定，ELISA 通過將某些組分吸附到物理固定的固相上來分離分析反應混合物的某些組分。在 ELISA 中，將液體樣品添加到具有特殊結合特性的固定固相上，然后依次添加多種液體試劑、孵育和洗滌，然后發生一些光學變化（例如，酶促反應產物的顯色）孔中的最終液體，用于測量分析物的量。定性“讀數"通常基于通過分光光度法檢測透射光的強度，這涉及對某些特定波長的光通過液體（以及多孔板格式中孔的透明底部）的透射進行定量。檢測的靈敏度取決于分析反應過程中信號的放大。由于酶反應是放大過程，因此信號是由酶產生的，酶以固定比例與檢測試劑連接，以實現準確的定量 - 因此稱為“酶聯"。

分析物也稱為配體，因為它會特異性結合或連接到檢測試劑，因此 ELISA 屬于更大的配體結合測定類別。配體特異性結合試劑是“固定的"，即通常涂在透明底部，有時也涂在孔的側壁上（這里是固定的“固相“固體基質"，而不是可以被固定的固體微粒/珠子）。洗掉），它通常被構建為稱為“ELISA 板"的多孔板。通常，與其他形式的免疫測定一樣，使用抗原-抗體型反應的特異性是因為它很容易作為試劑大量產生特異性針對抗原的抗體。或者，如果分析物本身是抗體，