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orimabs目錄

更新時間:2019-11-13      點擊次數(shù):2617

 

orimabs目錄

向量

  • 酵母展示載體
  • 酵母分泌表達(dá)載體
  • 噬菌體展示載體
  • 大腸桿菌表達(dá)載體
  • 哺乳動物細(xì)胞表達(dá)載體
  • 慢病毒載體


  •  

VH,VK和VL引物

  • 能夠擴(kuò)增整個人類抗體庫

感受態(tài)細(xì)胞

  • *名 (化學(xué))
  • Bl21(化學(xué))
  • TG1(電穿孔)

酵母展示載體

圖片

pYDS1(貨號:mAb001)

pYDS1是一種酵母展示載體,用于在酵母菌株EBY100表面展示單體scFv。AGA1是酵母細(xì)胞表面蛋白,AGA2通過2個二硫鍵與AGA1偶聯(lián)。通過鉸鏈與AGA2的C末端融合,scFv顯示在酵母表面。設(shè)計scFv的N末端的標(biāo)志標(biāo)簽和C末端的V5標(biāo)簽,以便通過流式細(xì)胞術(shù)方便地檢測scFv的表達(dá)和抗原結(jié)合。(G4S)3柔性接頭被設(shè)計為VL和VH之間的內(nèi)部接頭。該載體設(shè)計用于VL和VH的逐步克隆,并且VH和VL克隆的所有酶位點均未出現(xiàn)在VH和VL種系基因中,并且翻譯的氨基酸有利于形成柔性接頭。 

引用

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pYDS1.1 (Cat#:mAb002)

pYDS1.1與pYDS1的單體scFv展示相似,只是VL和VH的多個克隆位點縮短至9 bp,這允許使用PCR純化試劑盒直接純化線性化載體,而無需通過凝膠去除9 bp插入片段分離。該載體被設(shè)計用于VL和VH的一步克隆,既可以組裝成scFv,也可以通過三個片段缺口修復(fù)。酵母具有的同源重組系統(tǒng),該系統(tǒng)可通過為三個片段設(shè)計的同源末端將共轉(zhuǎn)化的線性化載體VL和VH有效地組裝成正確的向量scFv形式。 

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pYDS2 (貨號:mAb003)

如果將分離的scFv的終目標(biāo)設(shè)計為二聚體,例如scFv-Fc或全抗體,則建議使用二聚體-scFv庫,因為高親和力單體scFv可能無法轉(zhuǎn)化為更高親和力的二聚體。明智的方法是直接隔離具有較暗淡形式的高親和力的scFv。pYDS2是為此目的而設(shè)計的。通過鉸鏈區(qū)中的天然3個二硫鍵,在酵母表面上顯示出較暗的scFv。pYDS2設(shè)計用于像pYDS1一樣逐步克隆VL和VH。所有標(biāo)簽,接頭和酶位點均與pYDS1相同,可進(jìn)行有效的基因克隆,靈活的接頭和方便的流式細(xì)胞術(shù)檢測scFv。
 

引用

酵母分泌表達(dá)載體
 

圖片

pYS1 (Cat#:mAb004) 和pYS2 (Cat#:mAb005)

通過磁性和流式分選富集抗原特異性酵母展示種群后,可以使用流式細(xì)胞儀鑒定高親和力的單個scFc克隆。然而,這是費(fèi)時和費(fèi)力的,并且顯示scFv需要稍后為了親和力和其他表征而轉(zhuǎn)化為可溶形式。如果將展示型scFv轉(zhuǎn)化為可溶性scFv,然后使用高通量ELISA鑒定單個克隆,則效率更高。pYS1和pYS2載體pYDS1,pYDS1.1和pYDS2的對應(yīng)物被設(shè)計用于可溶性scFv表達(dá)。只需使用PCR從富集的展示酵母種群中擴(kuò)增scFv基因,并與線性化載體pYS1,pYS1.1或pYS2共轉(zhuǎn)化為YVH10酵母菌株,挑選單個克隆,在96個深孔板中培養(yǎng)并誘導(dǎo),含有scFv的上清液可用于ELISA鑒定??梢詮?6孔儲備液中擴(kuò)增陽性克隆,以進(jìn)行大規(guī)模scFv純化以進(jìn)一步表征。載體pYS1與pYDS1和pYDS1.1配對用于單體scFv表達(dá),而pYS2與pYDS2對用于調(diào)光scFv表達(dá)。
 

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噬菌體展示載體

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pDCK1 (Cat#:mAb006) 和pDCL1 (Cat#:mAb007)

載體pDCK1和pDCL1分別包含IgG1的CH1恒定區(qū),kappa和λ恒定區(qū),用于Fab展示,只需將VL / VK和VH克隆到載體中即可。所有恒定區(qū)均針對大腸桿菌表達(dá)進(jìn)行了密碼子優(yōu)化,并且為有效消化和連接而設(shè)計的所有酶位點均未出現(xiàn)在抗體V基因中。已經(jīng)為VK / VL和VH克隆酶設(shè)計了長填充序列,以進(jìn)行有效的酶消化。這兩個載體也可以用于使用Xba I / Not I消化的噬菌體展示scFv庫構(gòu)建。

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圖片

pDCK1.1 (Cat#:mAb008) 和pDCL1.1 (Cat#:mAb009)

pDCK1.1和pDCL1.1載體分別與pDCK1和pDCL1相同,不同之處在于VK / VL和VH克隆酶的填充序列縮短到9bp,從而可以通過PCR純化試劑盒方便地純化消化的載體,而無需人工操作消耗凝膠分離。 
 

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雙順反子慢病毒載體

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pLENI (Cat#:mAb010) 和pLEN2A (Cat#:mAb011)


建立抗原陽性細(xì)胞系對于基于細(xì)胞的抗體文庫淘選和隨后驗證分離的抗體是必需的。慢病毒載體pLENI和pLEN2A設(shè)計用于同時雙順反子表達(dá)目的蛋白和EGPF。EGFP將在細(xì)胞內(nèi)表達(dá),以方便觀察成功的病毒感染和基因表達(dá),以及通過FACS(熒光激活細(xì)胞分選)純化高表達(dá)細(xì)胞。如果目的蛋白質(zhì)是細(xì)胞膜蛋白質(zhì),則翻譯的蛋白質(zhì)將位于細(xì)胞表面。載體pLENI使用IRES(內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點)序列連接目標(biāo)基因和EGFP基因,以確保兩種蛋白質(zhì)的mRNA表達(dá)水平相同;而載體pLEN2A使用2A序列來確保兩種蛋白的蛋白表達(dá)水平相同,它會被內(nèi)體2A位點的酶切割所分離。通過將pLENI或pLEN2A與提供VSVG,REV和Gag / pol蛋白表達(dá)的載體共轉(zhuǎn)染到HEK293細(xì)胞中,可以輕松制得慢病毒。
 

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大腸桿菌  表達(dá)載體

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pECO (貨號:mAb012)

載體pECO設(shè)計用于通過大腸桿菌從強(qiáng)噬菌體T7啟動子高水平表達(dá)目的基因。所有的酶都是為方便和有效的基因克隆而設(shè)計的。沒有為此向量設(shè)計的標(biāo)簽。為了方便純化,可以根據(jù)需要在目的蛋白的N或C端設(shè)計His6標(biāo)簽。IPTG誘導(dǎo)蛋白質(zhì)表達(dá)。
 

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哺乳動物細(xì)胞表達(dá)載體
 

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pMAM1 (貨號:mAb013)

載體pMAM1設(shè)計用于在哺乳動物細(xì)胞(例如CHO或HEK293細(xì)胞)中表達(dá)分泌蛋白。強(qiáng)大的CMV啟動子驅(qū)動蛋白質(zhì)表達(dá),由B淋巴細(xì)胞中大多數(shù)抗體分泌固有的VH3信號肽引導(dǎo),然后是His8標(biāo)簽以方便蛋白質(zhì)純化。設(shè)計了多個克隆位點中的酶以方便,地克隆基因。重組蛋白可以直接從上清液中純化。如果使用無血清哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng),則一步純化鎳樹脂可產(chǎn)生高純度的蛋白質(zhì)。新基因表達(dá)盒允許通過G418選擇建立穩(wěn)定的表達(dá)細(xì)胞系。

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圖片

pMAM1-nFc (Cat#:mAb014) 和pMAM1-cFc (Cat#:mAb015)

如果血清分泌在細(xì)胞外,則無血清哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)可以方便,地純化高純度蛋白質(zhì)。如果蛋白質(zhì)是天然分泌蛋白,通常很容易在上清液中表達(dá)蛋白質(zhì)。然而,在許多情況下,細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)或部分蛋白質(zhì),例如細(xì)胞表面蛋白質(zhì)的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域,很難在分泌途徑中表達(dá),這很可能是由于其天然易位機(jī)制的改變。難于表達(dá)的蛋白質(zhì)與易表達(dá)的蛋白質(zhì)如Fc的融合是一種解決方案,因為易表達(dá)的蛋白質(zhì)可以充當(dāng)將難于表達(dá)的蛋白質(zhì)帶出細(xì)胞的載體。為此目的設(shè)計了載體pMAM1-nFc和pMAM1-cFc。它們基于通過在目標(biāo)蛋白質(zhì)的N或C末端引入人IgG1 Fc片段來構(gòu)建pMAM1。為了方便純化,在融合蛋白的N末端設(shè)計了His8標(biāo)簽。為避免Fc與目標(biāo)蛋白之間可能的構(gòu)象障礙,在Fc與多克隆位點(MCS)之間設(shè)計了柔性(G4S)3接頭。還可通過在兩個蛋白之間設(shè)計的位點通過TEV切割從融合蛋白中去除Fc片段。細(xì)胞表面抗原的胞外域的制備通常是非常具有挑戰(zhàn)性的。這兩個融合載體能夠高水平表達(dá)大多數(shù)細(xì)胞表面蛋白的胞外域。

引用

人類VH,VL和VK引物  (貨號:  mAb 016)

基于大的抗體數(shù)據(jù)庫IMGT,我們設(shè)計了一組能夠擴(kuò)增所有人類抗體庫的簡并引物。正向引物退火至V基因的一框架區(qū),而反向引物退火至J基因??偣矠閂H設(shè)計了7個正向和3個反向引物。為VK設(shè)計5個正向和4個反向引物,為VL設(shè)計9個正向和5個反向引物。IgM的反向引物也可用于天真的文庫構(gòu)建。 

引用

大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
 

*0 (Cat#:mAb017) (20個反應(yīng),價格$ 200,化學(xué))
*0具有化學(xué)感受態(tài)的大腸桿菌在單個試管中的轉(zhuǎn)化效率為1 x 109 cfu / µg質(zhì)粒DNA。它們是克隆和質(zhì)粒繁殖的理想選擇。它們允許高拷貝數(shù)質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。

BL21 (Cat#:mAb018) (20個反應(yīng),售價200美元,化學(xué))
BL21化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞在單個試管中的轉(zhuǎn)化效率為1 x 108 cfu / µg質(zhì)粒DNA。BL21大腸桿菌細(xì)胞是高水平表達(dá)無毒重組蛋白的理想選擇。

TG1 (Cat#:mAb019) (20個反應(yīng),售價200美元,電穿孔)
TG1是構(gòu)建噬菌體展示庫的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞。TG1電感受態(tài)細(xì)胞具有1×1010 cfu / µg質(zhì)粒DNA的率,非常適合噬菌體展示抗體或肽庫的構(gòu)建。 
 

加載緩沖區(qū)

DNA上樣緩沖液(10 x) (Cat#:mAb020)(3 x 1 ml,$ 30)
DNA上樣緩沖液(10X)是一種液體緩沖液,可輕松裝載和跟蹤
瓊脂糖或天然聚丙烯酰胺凝膠中的DNA樣品。 

蛋白質(zhì)上樣緩沖液(6x) (Cat#:mAb021)(10 ml,$ 15)
Laemmli是一種用于蛋白質(zhì)電泳和蛋白質(zhì)印跡的樣品緩沖液。將每一體積的6X樣品緩沖液添加到五體積的蛋白質(zhì)樣品中,煮沸或加熱5-10分鐘。

 

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