丁香综合网I一区黄色I亚洲三级在线观看I亚洲视频小说I国产视频精品免费I午夜日韩在线观看I手机在线看片国产I狠狠干在线播放I精品国产自I手机av免费在线观看I又污又黄又爽的网站I国产1区2区3区中文字幕I俺去婷婷I在线免费看v片Ijzjzjz免费视频观看I久久精品中文闷骚内射I色呦呦国产I天天综合中文字幕I不卡一区avI人人玩人人爽

您好!歡迎訪問上海起發(fā)實驗試劑有限公司網(wǎng)站!
全國服務(wù)咨詢熱線:

15921799099

當(dāng)前位置:首頁 > 技術(shù)文章 > Favorgen FABGK100說明書

Favorgen FABGK100說明書

更新時間:2018-10-10      點擊次數(shù):2961

Favorgen FABGK100說明書

Favorgen位于中國臺灣國家生物技術(shù)園區(qū)。它通過自動化系統(tǒng)建立了ISO合格工廠,
生產(chǎn)高質(zhì)量的分子生物學(xué)產(chǎn)品和臨床化學(xué)試劑。目前,F(xiàn)avorgen在美國,中國,韓國和丹麥設(shè)立分支機構(gòu),并在30多個國家設(shè)立了分銷網(wǎng)絡(luò)。自成立以來,F(xiàn)avorgen已經(jīng)在其先進的生產(chǎn)設(shè)施上投入了大量資金,以競爭力的價格為客戶提供高質(zhì)量的產(chǎn)品。Favorgen致力于通過與學(xué)術(shù)和行業(yè)合作伙伴的內(nèi)部和合作開展研究,以不斷提供高質(zhì)量的創(chuàng)新產(chǎn)品。

 

Favorgen FABGK100說明書

Nucleic-acids extraction Genomic DNA Extraction

核酸提取基因組DNA提取

Genomic DNA Extraction Blood DNA Mini / Midi / Maxi Kit

FavorPrep Genomic DNA Mini Kit (Blood/Cultured Cell)

Cat. No.:

FABGK 100 (100 Preps)

FABGK 300 (300 Preps)

RBC Lysis Buffer 135 ml 405 ml

FATG Buffer 30 ml 75 ml

FABG Buffer 40 ml 100 ml

W1 Buffer 45 ml 130 ml

 

Wash Buffer*

Elution Buffer

(concentrated)

25 ml

30 ml

50 ml

75 ml

FABG Column

 

100 pcs

300 pcs

2 ml Collection Tube 200 pcs 600 pcs

 

 
 

 

 

 

 

次打開時,加入100 ml/200 ml乙醇(96%~100%)到洗滌緩沖液中。

規(guī)格

 

樣本量:全血高達300μl

 

凍血可達200μl,布瓦毛可達200μl

 

培養(yǎng)的動物細胞多可達1×10 7

 

培養(yǎng)的細菌細胞多可達1x109,真菌細胞可達5x107。

 

平均產(chǎn)量:約50μg格式:自旋柱

 

處理時間:60分鐘內(nèi)

 

重要事項

 

本系統(tǒng)中提供的緩沖區(qū)包含刺激物。在處理這些緩沖器時,戴上手套和實驗室外套。

 

為了貓。沒有。FABGK 100,次打開時加入100 ml乙醇(96~100%)洗滌緩沖液。為了貓。沒有。FABGK 300,加入200毫升乙醇(96~100%),次打開時加入洗滌緩沖液。

 

在試管中加入200μ1的FATG緩沖液,再用旋渦或圓孔法重新懸浮細胞球團。

 

在室溫下孵育5分鐘,然后從第2步(細胞溶解)開始遵循培養(yǎng)的細胞協(xié)議。

 

發(fā)現(xiàn)并修理故障,解決紛爭:

 

低產(chǎn)量

 

使用了太多的細胞

 

-減少樣本量。

 

蛋白酶K活性不足導(dǎo)致細胞溶解不良

 

-使用新鮮或保存良好的蛋白酶K庫存溶液。

 

由于與FABG緩沖液混合不足,細胞溶解能力差

 

-用脈沖渦旋法將樣品和光纖光柵緩沖液立即*混合。

 

細胞溶解能力差,原因是培養(yǎng)時間不足

 

-延長孵化時間,確保沒有殘留的微粒。

 

在轉(zhuǎn)入fbg midi柱之前,未將乙醇加入裂解液中。

 

當(dāng)次打開時,乙醇不會加入到洗滌緩沖液中;在加入洗滌緩沖液之前,乙醇的體積或百分比是不正確的。

 

基因組DNA的洗脫是無效的

 

-確保ddH2O的pH值在7.5-8.5之間。

 

-加入萃取緩沖液或ddH2O后,在離心前將FABG MIDI柱放置5~10 min。

 

 

血樣中含有血疙瘩

 

-將血樣與抗凝血劑混合,防止血栓形成。

 

樣品太粘稠

 

-減少樣本量。

 

純化的dna在下游應(yīng)用中表現(xiàn)不佳。

 

樣品是舊的

 

-總要使用新鮮或保存完好的樣本提取基因組DNA。

 

乙醇殘留污染

 

--在洗滌步驟之后,在4000xg下離心10分鐘以干燥FabgMIDI柱。

 

RNA污染

 

 

特別協(xié)議:(針對細菌)步驟1-樣品準(zhǔn)備

 

革蘭陰性菌:

 

將適當(dāng)數(shù)量的細菌細胞(多可達1×10 9)轉(zhuǎn)移到1.5ml微離心管(未提供)并全速離心

 

(14,000 rpm或10,000 x g)1分鐘。然后丟棄上清液。

 

加入2 0 0μ1的FATG緩沖液,再用旋渦或管狀再懸浮球團。室溫下孵育5分鐘。

 

從第二步開始遵循培養(yǎng)的細胞協(xié)議(細胞溶解)。

 

革蘭陽性細菌:

 

將適當(dāng)數(shù)量的細菌細胞(多可達1×10 9)轉(zhuǎn)移到1.5ml微離心管(未提供)并全速離心

 

(14,000 rpm或10,000 x g)1分鐘。然后丟棄上清液。

 

加入200μ1的溶菌酶緩沖液(20 mg/ml溶菌酶;20 mm Tris-HCl;2 mm EDTA;1%TritonX-100,pH 8.0;制備新鮮溶菌酶緩沖液)。

 

在使用前),再用旋渦或管道將球團重新懸浮。

 

室溫下孵育10分鐘。在孵化過程中,每2-3分鐘倒置一次.

 

從第二步開始遵循培養(yǎng)的細胞協(xié)議(細胞溶解)。

 

特別議定書:(用于真菌)

 

步驟1-樣品準(zhǔn)備

 

收集適當(dāng)數(shù)量的真菌細胞(多5×10 7)至1.5ml微離心管(未提供),離心機為5 000 x g

 

10分鐘。然后丟棄上清液。

 

加入6 0 0μ1的山梨醇緩沖液(1.2 M山梨醇;10 mm CaCl 2;

 

0.1mTris-HCl,pH7.5;35 mm-巰基乙醇),并重新懸浮顆粒。

 

添加200 U的裂解酶或酶解酶。在30℃時孵育30分鐘。

 

將混合物在2,000 x克離心10分鐘,取出球體,然后移除上清液。

 

 

一般性議定書:

在開始以下步驟之前,請閱讀重要說明。

 

第1步-紅細胞溶解

 

在抗凝治療收集管中收集新鮮人血。

 

將300μl新鮮血液轉(zhuǎn)移到1.5ml微離心管(未提供)。如果樣品超過300μl(可達1毫升),將樣品加入無菌15毫升離心管。

 

加入3倍紅細胞溶解緩沖液樣品體積,倒置混合。不要漩渦。

 

室溫下孵育10分鐘。

 

3,000 x g離心5分鐘,*取出上清液。

 

用1 0 0μ1的紅細胞裂解緩沖液復(fù)蘇球團。

 

步驟2-細胞溶解

 

加入200μl的光纖光柵緩沖器,并通過渦流混合。

 

在室溫下孵育10分鐘,或直到樣品溶解液清澈為止。在孵化過程中,每隔3分鐘倒置一次管子。

 

預(yù)熱需要70℃水浴中的排出緩沖液(步驟5)。

 

(可選步驟):如果需要無RNA的基因組DNA,在樣品中加入5μl 10 mg/mlRNase A,然后用渦流混合。在室溫下孵育5分鐘。

 

步驟3-綁定

 

在樣品中加入200μl乙醇(96%~100%),攪拌10秒。(如果有任何沉淀物,就會噴出。)

 

將FABG柱放置到2ml收集管上。將樣品混合物(包括任何沉淀物)仔細轉(zhuǎn)移到FABG柱。離心機

 

全速5分鐘(14,000轉(zhuǎn)或10,000克)并丟棄2毫升收集管。將FABG列放置在一個新的2ml收集管中。

 

(適用于新鮮血液)

 

特別議定書:(用于培養(yǎng)細胞)

 

步驟1-樣品準(zhǔn)備

 

培養(yǎng)動物細胞:

 

在收獲前使貼壁細胞變小。

 

將適當(dāng)數(shù)量的細胞(至多1×10 7)轉(zhuǎn)移到1.5ml微離心管(未提供),并以6 000 x g離心20秒。

 

取上清,用150μ1紅細胞溶解緩沖液重新懸浮。然后按照步驟2(細胞溶解)。

 

新鮮血液(人血除外):

 

哺乳動物血液的樣本體積(無核)可以是

 

有核紅細胞(如鳥類或魚類)的樣品體積可達10μl。

 

將150μ1的FATG緩沖液和血樣放入1.5ml微離心管(未提供)。按旋渦混合,然后按照步驟2(細胞溶解)進行。

 

步驟2-細胞溶解

 

加入200μl的光纖光柵緩沖器到樣品和漩渦5秒。

 

在70℃下孵育10分鐘,或直到樣品溶解液清澈為止。在孵化過程中,每隔3分鐘倒置一次管子。

 

預(yù)熱需要70℃水浴中的排出緩沖液(步驟5)。

 

(可選步驟):如果需要無RNA的基因組dna,添加5μl

 

RNase A濃度為10 mg/ml,用旋渦混合。在室溫下孵育5分鐘。

 

從步驟3(綁定)開始遵循“一般協(xié)議”。

 

步驟4-綁定

 

在樣品中加入250μl乙醇(96%~100%),攪拌10秒。(如果有任何沉淀物,就會噴出。)

 

將FABG柱放置到2ml收集管上。將樣品混合物(包括任何沉淀物)轉(zhuǎn)移到FABG柱。離心機5分鐘

 

全速(每分鐘14,000轉(zhuǎn)或10,000克)并丟棄2毫升的收集管。將FABG列放置在一個新的2ml收集管中。

 

步驟5-清洗

 

用400μl W1緩沖液清洗光纖光柵柱。離心機1分鐘

 

全速(14,000轉(zhuǎn)或10,000 x克)并丟棄流過.

 

將FABG柱放回2ml收集管中。用600μl洗滌緩沖液(添加乙醇)清洗光纖光柵柱。全速離心1分鐘(每分鐘14,000轉(zhuǎn)或10,000克),并丟棄流動節(jié)流閥。 Ghana 加納.

 

-確保乙醇在次打開時加入到洗滌緩沖液中。

 

將FABG柱放回2ml收集管中。離心機

 

全速增加3分鐘(14,000轉(zhuǎn)或10,000克)干燥柱。

 

-重要的一步!這一步將避免殘留的液體來抑制后續(xù)的酶促反應(yīng)。

 

步驟6-釋放

 

將干燥的FABG柱放置在新的1.5ml微離心管上。

 

將預(yù)熱排液緩沖液或TE的100μ1加入到FABG柱膜中心。

 

-重要的一步!若要進行有效洗脫,請確保洗脫液為

 

分散在膜中心,*吸收。

 

將FAGB欄在37 C處孵育10分鐘。

 

全速離心1分鐘(14,000轉(zhuǎn)或10,000克),以躲避DNA。

 

-標(biāo)準(zhǔn)洗脫體積為100μl。如果需要更高的dna產(chǎn)量,重復(fù)dna。

 

洗脫步驟可提高DNA的回收率,總體積可達2 0 0μ1。

 

步驟終-純dna

 

將DNA片段存儲在4℃或-20℃

 

第4步-清洗

 

用400μl W1緩沖液清洗光纖光柵柱。離心30秒

 

全速(14,000轉(zhuǎn)或10,000 x克)并丟棄流過.

 

將FABG柱放回2ml收集管中。用600μl洗滌緩沖液(添加乙醇)清洗光纖光柵柱。全速離心30秒(每分鐘14,000轉(zhuǎn)或10,000克),然后丟棄- 通過,穿過.

 

-確保乙醇在次打開時加入到洗滌緩沖液中。

 

將FABG柱放回2ml收集管中。離心機

 

全速增加3分鐘(14,000轉(zhuǎn)或10,000克)干燥柱。

 

-重要的一步!這一步將避免殘留的液體來抑制后續(xù)的酶促反應(yīng)。

 

第5步-逃避

 

將干燥的FABG柱放置在新的1.5ml微離心管上。

 

特別議定書:(適用于冰凍血液)

 

步驟1-樣品準(zhǔn)備

 

將多達200μl的血液轉(zhuǎn)移到1.5ml微離心管(未提供)。如果樣本容量小于200μl,則添加適當(dāng)?shù)膒bs卷。

 

在樣品中加入30μl蛋白酶K(10 mg/ml),并進行簡單混合。然后在60℃孵育15分鐘。

 

步驟2-細胞溶解

 

加入200μl光纖光柵緩沖器到樣品中,用渦流混合。

 

在70℃水浴中孵育15分鐘,將樣品溶解。在孵化過程中,每3分鐘倒置一次樣品。

 

預(yù)熱需要70℃水浴中的排出緩沖液(步驟5)。

 

(可選步驟):如果需要無RNA的基因組DNA,在樣品中加入5μl 10 mg/mlRNase A,然后用渦流混合。在室溫下孵育5分鐘。

 

從步驟3(綁定)開始遵循“一般協(xié)議”。

 

特別議定書:(為Buffy Coat)

 

步驟1-樣品準(zhǔn)備

 

將全血在3,300 xg下離心10分鐘,在室溫下可得到三個不同的組分:上清層為血漿;

 

中間層是布菲膜,含有濃縮的白細胞;底層是濃縮的紅細胞。從布菲皮毛中提取總dna將產(chǎn)生比dna高出5-10倍的DNA。 一個等價

 

全血的體積。

 

第2步-紅細胞溶解

 

將多達200μl的布菲大衣轉(zhuǎn)移到1.5ml的微離心管中(未提供)。

 

加入3倍紅細胞溶解緩沖液樣品體積,倒置混合。

 

室溫下孵育10分鐘。在孵化過程中,每隔3分鐘倒置一次管子。

 

全速離心1分鐘(14,000轉(zhuǎn)或10,000克),*除去上清液。

 

用5 0 0μ1的紅細胞裂解緩沖液對球團進行復(fù)蘇。然后以全速離心1分鐘(14,000轉(zhuǎn)或10,000克),*除去上清液。

 

用紅細胞裂解緩沖液2 0 0μl復(fù)蘇球團。(僅用旋渦將管子混合。確保球團*重新掛起,否則在處理綁定步驟時將阻止列)。

 

步驟3-細胞溶解

 

在樣品中加入250μ1的光纖光柵緩沖液,通過渦流混合。

 

在室溫下孵育30分鐘,或直到樣品溶解液清澈為止。在孵化過程中,每隔3分鐘倒置一次管子。

 

預(yù)熱需要70℃水浴中的排出緩沖液(步驟6)。

 

(可選步驟):如果需要無RNA的基因組DNA,在樣品中加入5μl 10 mg/mlRNase A,然后用渦流混合。在室溫下孵育5分鐘。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

基因組DNA提取血液DNA Mini / Midi / Maxi試劑盒

FABGK 000

FavorPrep™血液/培養(yǎng)細胞基因組DNA提取迷你試劑盒

4個準(zhǔn)備。

蛋白酶K粉末
FATL緩沖液
FABG緩沖液
W1緩沖液
洗滌緩沖液(濃)
洗脫緩沖液
FABG迷你柱
2ml收集管
1.5ml洗脫管

在室溫(15~25℃)下保存2年。
除蛋白酶K粉外,貯存于4℃。

FABGK 001

50個準(zhǔn)備。

FABGK 001-1

100個準(zhǔn)備。

FABGK 001-2

300個準(zhǔn)備。

FABGK 100

FavorPrep™血液/培養(yǎng)細胞基因組DNA提取迷你試劑盒

100個準(zhǔn)備。

RBC裂解緩沖液 FATL緩沖液 FABG緩沖液 W1緩沖液 洗滌緩沖液(濃) 洗脫緩沖液FABG迷你柱 2ml收集管 




 

在室溫(15~25℃)下保存2年。
除蛋白酶K粉外,貯存于4℃。

FABGK 300

300個準(zhǔn)備。

 

 

FABGK 002-S

FavorPrep血液/培養(yǎng)細胞基因組DNA提取Midi試劑盒

2個準(zhǔn)備。

蛋白酶K粉末
FABG緩沖液
洗滌緩沖液W1(濃)
洗滌緩沖液W2(濃)
洗脫緩沖液
FABG Midi柱
15 ml洗脫管

在室溫(15~25℃)下保存2年。

除蛋白酶K粉外,貯存于4℃。

FABGK 002

20個準(zhǔn)備。

FABGK000-MAXI

FavorPrep™血液/培養(yǎng)細胞基因組DNA提取Maxi試劑盒

2個準(zhǔn)備。

Proteinase K Powder 
FABG Buffer 
W1 Buffer 
Wash Buffer(濃)
洗脫緩沖液
FABG Maxi Columns 
50 ml Elution tubes

在室溫(15~25℃)下保存2年。
除蛋白酶K粉外,貯存于4℃。

 

 

 

 

 

 

 

 

上海起發(fā)是實驗試劑一站式采購服務(wù)商

1:強大的進口輻射能力,血清、抗體、耗材、大部分限制進口品等。

2:產(chǎn)品種類齊全,經(jīng)營超過700多品牌,基本涵蓋所有生物實驗試劑耗材。

3:提供加急服務(wù),貨品一般1-2周到貨。

4:富有競爭力的價格優(yōu)勢,絕大部分價格有優(yōu)勢。

5:多年積累良好的信譽,大部分客戶提供貨到付款服務(wù)。客戶包括清華、北大、交大、復(fù)旦、中山等100多所高校,ROCHE,阿斯利康、國藥、fisher等知藥企。

6:上海起發(fā)還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等幾十家國外公司授權(quán)代理。

7:我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批發(fā),歡迎合作。

 

上海起發(fā)實驗試劑有限公司
地址:上海浦東川沙鎮(zhèn)川沙路6619號上海起發(fā)實驗試劑有限公司
郵箱:xs1@78bio.com
傳真:021-50724961
關(guān)注我們
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號了解更多信息:
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號
了解更多信息
主站蜘蛛池模板: 欧美日韩视频免费| 国产特黄| 一区二区三区波多野结衣| 国产av一区二区不卡| 国产性av| 大学生三级中国dvd| 国产日韩一区二区三区| 午夜888| av免费观看大全| 亚洲黄色免费在线观看| 成人在线免费毛片| 免费黄视频网站| 日韩精品免费看| 啪啪福利视频| 洗澡啪av一进一出久久| 国产成人精品视频| 国产床上视频| 国产自产精品| 99免费在线视频| av一道| 中文字幕一区二区三区免费看| 亚洲高清色图| 日本欧美日韩| 久久免费视频99| 男人天堂资源| 日本午夜电影| 国产精品白浆一区二小说| 少妇免费看| 九色精品视频| a级欧美| 黄三级| 在线看黄网站| 99热超碰| 操出白浆视频| 欧美一级淫片aaaaaaa| 免费中文视频| 能免费看18视频网站| 久操视频免费观看| 亚洲成人伊人| 成人录像| 亚洲国产精品女人久久久| 日本人妻熟妇久久久久久| 婷婷色伊人| 色94色欧美| 国产特级黄色录像| www.天堂av| eeuss黑人影院com影院| 男人爆操女人| 成人在线观看网站| 国产一级免费在线| 欧美日韩在线视频免费播放| 亚洲经典久久| 色综合综合| 久久美女性网| 久久精品黄| 伊人蕉久中文字幕无码专区| 亚洲电影男人天堂| 黄色三级视屏| 久久九精品| 日日日噜噜噜| www久久久久久| 伊久在线| 小镇姑娘高清播放视频| 国产深夜福利视频在线| 成人a8198va| 少妇久久久久久被弄高潮| 96av在线视频| 伊人中文字幕在线观看| 久久女女| aaaaa少妇高潮大片| 秋霞亚洲| 办公室摸腿吻胸激情视频| 高h喷水荡肉少妇爽多p视频| 国产靠逼视频| 色噜噜视频| 女攻总攻大胸奶汁(高h)| 新婚之夜玷污岳丰满少妇在线观看| 久久久亚洲| 91一区二区| av天天在线| 日日躁夜夜躁狠狠久久av| 久操资源网| 青青草综合视频| 中文字幕100页| 人人草人人草| 中文在线观看免费| 视频免费1区二区三区| 欧美放荡性医生videos| 后进极品美女白嫩翘臀| 天天草av| 91国产丝袜在线播放| 国产精品久久婷婷六月丁香| 午夜性| 亚洲av无码乱码国产精品| 一级性生活黄色片| 99香蕉网| 白丝久久| 国产精品原创av| 日韩欧美区| 国产精品69毛片高清亚洲| 欧美三级日本三级| 女人的天堂av| 大尺度床戏揉捏胸视频| 亚洲成人精品久久久| www.亚洲视频.com| www.三级| 91av网址| av电影网站在线观看| 国产视频第三页| 九七在线视频| 蜜臀va| 德国经典free性复古xxxx| va网站| 男人操女人的免费视频| 人妻精品无码一区二区| 国产高清亚洲| 亚洲国产日韩精品| 国产性爱精品视频| 亚洲精品一级片| 污黄视频网站| 天天天天添天天拍天天谢| 欧美成人图区| www.99视频| 91丨porny丨成人蝌蚪| av毛片大全| 伊人3| 亚洲AV无码成人精品区东京热| 久久av色| av免费在线播放网站| 久久激情小说| 激情四射网站| 久久国产免费| www.jizz国产| 91这里只有精品| 久久中文字幕一区二区| 国产91大片| 亚洲av色香蕉一区二区三区| 国产区一区二区| 91国内精品自线在拍白富美| 日韩亚洲欧美综合| 久久少妇av| 综合激情婷婷| 在线播放你懂的| 国产午夜在线| 爆乳熟妇一区二区三区霸乳| 超碰青草| 天天天操| 91在线中文字幕| 午夜激情男女| 色婷婷久久久亚洲一区二区三区| 亚洲精品免费看| 青青色av| 日韩欧美在线观看| 99热香蕉| 亚洲色图,欧美| 欧美成人第一页| 亚洲一二三四五| 午夜一二三| 欧美日韩不卡视频| 蜜臀视频网站| 97小视频| 成人永久在线| 中文一区在线| 久草电影在线| 欧美综合社区| 好色综合网| 少妇精品偷拍高潮少妇漫画| 亚洲一区伦理| 超碰免费福利| 911国产在线| 成人高清网站| 依依成人综合| 不卡在线视频| 五月天黄色片| 久久综合中文| 69视频网| 国产香蕉久久久| 国产精品日韩专区| 91丨porny在线| 撸久久| www超碰| 日韩一区二区三区精品视频| 超碰凹凸| 91久久爽久久爽爽久久片| 日本免费不卡一区| 久久久久久久久久久国产| av第一区| 村上凉子av| 靠逼视频免费网站| 在线视频精品免费| 网站久久久| 日韩精品黄| 四虎自拍视频| 日本一级黄色| 色噜噜在线观看| 九色论坛| 复仇女尸在线观看| www.欧美激情.com| 男人爱看的网站| 日本一本高清| 狠狠躁18三区二区一区| 毛片2| 香蕉性视频| 麻豆久久久久久久久久| 国产电影一区二区三区爱妃记| 在线你懂得| 日韩在线黄色| 一级做a爰片| 毛片哪里看| 亚洲国产精品99久久| 在线免费观看av网站| 污片在线免费看| 天天天色| 亚洲国产欧美精品| 亚洲色图综合| 小sao货cao死你| 亚洲专区免费| 亚洲成人免费av| 少妇av导航| 狠狠久久婷婷| 欧美亚洲另类小说| 美女尻逼视频| 无码国产色欲xxxx视频| 欧美精品久久久久a| 美女大黄网站| 天堂精品久久| 亚洲色图20p| 日本亚洲精品一区二区三区| 久久久亚洲黄| 狠狠操天天射| 成人欧美一区二区三区黑人冫| 日本免费福利视频| 偷看农村妇女牲交| 国产中文在线观看| 午夜67194| 少妇被躁爽到高潮无码人狍大战| av福利网址| 欧美日韩国产成人| 在线观看视频色| 男人亚洲天堂| 亚洲乱熟| 亚洲精品色| 成人免费av片| 天天干天| 香蕉网站在线观看| 国模无码一区二区三区| 天天色伊人| 成人理论片| 自拍偷拍校园春色| 亚洲精品综合一区二区| 国产女教师bbwbbwbbw| 午夜成人亚洲理伦片在线观看| 人人妻人人爽一区二区三区| 欧美a性| 91特黄| 疯狂做爰的爽文多肉小说王爷| 日韩wwww| 久久国产午夜精品理论片推荐| 超碰伊人久久| 日本国产在线播放| 中文字幕资源网| jul599hd中文字幕| av免费在线播放网址| 91精品国产成人| 99综合久久| 亚洲乱色| 国产一区小视频| 娇妻张妍交换高潮| 久久免费国产| 2025国产精品| h网址在线观看| 中国一区二区视频| 色香av| 超碰2019| 国产高清二区| 亚洲一级精品| 青青视频免费看| 欧美一区日韩精品| 蜜桃视频污在线观看| 成人在线看片| 国产丝袜在线视频| 精产国品一二三区| 欧美激情一二三区| 亚洲暴爽av人人爽日日碰麻豆| 国产在线喷水| www.狠狠操| www.亚色网.com| 美国色综合| 少妇人妻一区二区| 久久久久亚洲av成人毛片韩| 久99| 91亚洲成人| 伊人久久亚洲综合| 日韩免费视频网站| 精品免费久久久久久久| 一区二区三区国产在线| 秋霞在线视频观看| 国产理论影院| 桃色av网站| 亚洲综合精品久久| 91爱爱·com| 欧美国产一区二区三区| 亚洲成人免费观看| 亚洲午夜精品一区二区三区他趣| 欧美一区二区三区成人| 97超碰色| 久久天天操| 91精品在线免费| 成人动漫视频在线| 米奇7777狠狠狠狠视频| 韩国伦理片在线看| 色漫在线观看| 在线观看av毛片| 亚洲人成人无码网www国产| 亚洲日本精品一区| 国产毛片高清| 人妖videosex高潮另类| 欧美一线视频| 91香蕉久久| 亚州快播| 69av在线播放| 99re国产在线| 色噜噜在线| 草操网| 亚洲在线免费av| 土耳其xxxx性hd极品| 欧美人妻精品一区二区免费看| 精品视频久久| 亚洲精品a级| 优优色综合| 欧美精品久久久久久| 日本不卡网| 久久人人爽人人片| 亚洲一区网址| 婷婷丁香六月| 亚洲淫欲| 亚洲色图,欧美| 免费成人美女女| 91在线观看免费视频| wwwav视频| 久久中文字幕视频| 久久新网址| 自拍偷拍亚洲视频| 操一操摸一摸| 看毛片视频| 久久成人综合| 成人一级片视频| 黄色av一级| www日本www| 亚色视频在线| 女人洗澡一级特黄毛片| 97蜜桃网| 欧美激情精品久久久久久变态| 日本女优中文字幕| 91无毒不卡| 免费的av网站| 亚洲国产v| 免费黄色小网站| 国产日韩欧美亚洲| www.中文字幕在线观看| 一区免费视频| 潘甜甜在线| 97黄网| www.污在线观看| 欧美成人黑人xx视频免费观看| 欧美动态视频| 少妇光屁股影院| 成人高清免费观看| 亚洲国产网| 色一情一区二区三区| 一区二区免费视频观看| 最新毛片网| 午夜福利一区二区三区四区| 中文字幕免费视频| 久久尤物视频| 特级黄色片免费看| 九草网| 91久久久久久久久久久久久| 亚洲爆爽| 久草国产精品视频| www.jizzjizz| 成人手机在线视频| 麻豆蜜桃av| 精品破处| 欧美一级黄色毛片| 韩国视频一区| 91网视频在线观看| av不卡在线观看| 少妇性生活视频| 日韩美女乱淫aaa视频| 欧美人性生活视频| 国产精品夫妻| 国产情侣酒店自拍| 末发成年娇小性xxxxx| 中文字幕第88页| 2023国产精品| 国产无套在线观看| 涩涩网站入口| 蜜桃又黄又粗又爽av免| 综合久久婷婷| 欧美精品在线一区二区| 欧美一级黄色毛片 | 亚洲黄色网址| 伊人色综合久久天天伊| 国产一卡二卡在线播放 | 一区二区三区激情视频| 亚洲av中文无码乱人伦在线观看| 999国产精品视频免费| 国产精久久久久| 色视频免费在线观看| 成人激情电影在线观看| 亚洲高清毛片| a√视频在线| 又黄又爽的视频网站| 亚洲精品久久久久久久久久久 | av影视在线观看| 五月天小说网| 黄色三级视频| 五月天丁香花婷婷| 亚洲精品视频在线免费| 日韩毛片电影| 91激情捆绑调教喷水| 美女色黄网站| 国产一线二线三线在线观看| 国产免费成人av| 瑟瑟视频在线看| 日韩喷潮| 九色视频网址| 国产精品99一区| 中文天堂在线资源| 免费看的黄网站| 成人av电影观看| 欧洲xxxxxx| 亚洲情侣在线| 在线观看免费av片| 日本女优一区| av在线播放中文字幕| 欧美大胆a视频| 午夜老司机福利| 波多野结衣一本| 里番精品3d一二三区| 日日干夜夜草| 午夜欧美精品| 免费看日b视频| 99pao成人国产永久免费视频| 日韩最新在线| 天堂网2020| 日韩av资源在线观看| 四虎网址在线观看| 最近中文字幕| 中文字幕十一区| 伊人激情综合| 91精品国产高潮对白| 97黄色片| 国产激情成人| 国产极品福利| 中文字幕日本不卡| 日韩城人网站| 日韩网站免费| 欧美极品少妇xxxxx| 色婷婷av一区二区三区软件| 久操精品| 成年人福利网站| 欧美视频黄| 日韩成人一级| av在线二区| 亚洲日本视频| 成年美女视频| 热re99久久精品国产99热| 亚洲一区二区中文字幕| 91久久中文字幕| 欧美另类在线观看| 亚洲福利| 日韩成年视频| 欧美怡红院视频| 性生交大片免费看视频| 欧美猛交ⅹxxx乱大交视频| 欧美日韩国产专区| 国产乱淫av片杨贵妃| 国产中文字幕在线免费观看| 亚洲色图欧洲| 亚洲一区二区麻豆| 日韩h视频| 伊人999| 男男在线观看| 久久99久久久| 国产精品嫩草影院桃色| 男女啊啊啊视频| 精品在线一区二区三区| 在线观看欧美一区| 中文字幕在线播放一区二区| 91福利网| 日本精品黄色| 天天综合天天| 黄色a毛片| 国产牛牛| 黑人多p混交群体交乱| 97人人超| 成人爱爱网站| 男人的天堂你懂的|